الخلفية والهدف: سرطان الثدي ثلاثي السلبية (triple-negative breast cancer ، TNBC) هو نوع فرعي خاص من سرطان الثدي يُعد من أكثر الأنواع تحديًا في العلاج، حيث يتميز بسهولة الانتقال وسوء التنبؤ بالمريض. تُعتبر شظايا الـ tRNA (tRNA-derived fragment ، tRF) نوعًا جديدًا من جزيئات RNA الصغيرة غير المشفرة، تشارك في العديد من العمليات الأمراض الفسيولوجية. تم في السابق من خلال تقنية التسلسل عالي الإنتاجية لـ tRF و tiRNA استخراج tiRNA-Met مثبط الورم من أنسجة TNBC. تهدف هذه الدراسة إلى البحث المتعمق في دور وآلية tiRNA-Met في نمو وانتقال TNBC. الطرق: تم استخدام تقنيتي RNA Pull-Down والكهرباء السائلة للكروماتوغرافيا المرتبطة بالمطيافية الكتلية (liquid chromatography-mass spectrometry ، LC-MS) بالإضافة إلى الترشح المناعي لـ RNA (RNA immunoprecipitation ، RIP) للكشف عن بروتينات الارتباط المحددة لـ tiRNA-Met. وتم فحص التموقع المشترك بين tiRNA-Met وبروتين الارتباط المحدد HNRNPF باستخدام اختبار التألق المناعي الخلوي، كما تم تقييم تأثير tiRNA-Met على تعبير mRNA الخاص بـ HNRNPF ومستويات البروتين عبر تفاعل البوليميراز العكسي كميًا (qRT-PCR) والتخطيط الغربي (Western blot). تم فحص تأثير الإفراط في تعبير tiRNA-Met على ملف النسخ الخاص بخلايا MDA-MB-231 باستخدام تسلسل RNA (RNA-seq)، وتمت دراسة مسارات الإشارة والجينات المستهدفة المنظمة بواسطة tiRNA-Met؛ وتم التحقق من مستوى النسخ الخاص بالجينة المستهدفة NECAB1 عبر qRT-PCR؛ وتم فحص تأثير نقص التعبير لبروتين HNRNPF على تعبير NECAB1. باستخدام قواعد بيانات لمخطط الجينوم للسرطان (The Cancer Genome Atlas ، TCGA) و GEPIA تم تحليل مستويات تعبير mRNA لكل من HNRNPF وNECAB1 في أنسجة TNBC، كما تمت دراسة مستوى بروتين HNRNPF عبر قاعدة بيانات UALCAN؛ وباستخدام قاعدة بيانات Kaplan-Meier Plotter أجريت تحليلات البقاء لكل من جين NECAB1 و HNRNPF. تم استخدام طريقة نقل البلازميد لإفراط التعبير في كل من خلايا MDA-MB-231 و BT-549 لـ NECAB1، وتم تقييم قدرة التكاثر والاختراق الخلوي باستخدام تجارب مجموعة العد الخلوي-8 (CCK-8) وتجربة Transwell على التوالي. مع وجود تثبيط لـ tiRNA-Met وقمع تعبيره تم الإفراط في تعبير NECAB1 أو تثبيط HNRNPF، وتم تقييم قدرة التكاثر والاختراق الخلوي بتجارب CCK-8 و Transwell. النتائج: يرتبط tiRNA-Met بشكل محدد مع HNRNPF ويتركز بشكل رئيسي في السيتوبلازم؛ لا يؤثر الإفراط أو نقص tiRNA-Met على تعبير mRNA ومستويات البروتين الخاصة بـ HNRNPF. يؤدي الإفراط في تعبير tiRNA-Met ونقص HNRNPF إلى تعزيز تعبير NECAB1 بشكل ملحوظ. أظهرت تحليلات TCGA و GEPIA و UALCAN أن مستويات mRNA وبروتين HNRNPF في أنسجة TNBC كانت مرتفعة بشكل ملحوظ مقارنة بالأنسجة المجاورة للورم، في حين انخفض تعبير NECAB1 بشكل ملحوظ (P<0.05). أظهرت تحليلات Kaplan-Meier Plotter وجود ارتباط إيجابي بين مستوى تعبير mRNA لـ NECAB1 وبقاء المرضى (P<0.05)، في حين أن مستوى تعبير بروتين HNRNPF مرتبط سلبيًا ببقاء المرضى (P<0.05). مقارنة بالخلايا الضابطة، أظهرت خلايا MDA-MB-231 و BT-549 ذات الإفراط في تعبير NECAB1 انخفاضًا ملحوظًا في القدرة على التكاثر (P<0.05) والاختراق الخلوي (P<0.05)؛ كما أن الإفراط في تعبير NECAB1 أو نقص HNRNPF بعد تثبيط tiRNA-Met قلل من زيادة التكاثر والاختراق المرتبطة بنقص tiRNA-Met. الخلاصة: يعمل tiRNA-Met على تعزيز تعبير NECAB1 عن طريق ارتباطه الهدف ببروتين HNRNPF، مما يثبط تقدم سرطان الثدي ثلاثي السلبية.

سرطان الثدي ثلاثي السلبية;شظايا tRNA;tiRNA-Met;HNRNPF;NECAB1