Hintergrund und Ziel Das Endometriumkarzinom stellt eine ernsthafte Bedrohung für die Gesundheit von Frauen dar, die Inzidenz und Mortalität steigen jährlich an und zeigen einen Trend zu jüngeren Patienten. Die Proteintyrosinkinase 2 (protein tyrosine kinase 2, PTK2) fungiert als Tumortreiber und ihre abnormale Aktivierung korreliert mit dem Malignitätsgrad des Tumors. Die Rolle von PTK2 im Endometriumkarzinom ist jedoch noch unklar. Ziel dieser Studie ist es, die Expression von PTK2 im Endometriumkarzinom, seine klinischen Bedeutungen und die upstream regulatorischen Mechanismen zu untersuchen. Methoden Es wurden Tumorgewebeproben und benachbarte Nicht-Tumorgewebeproben von Patienten mit Endometriumkarzinom gesammelt, die im Zeitraum von Januar 2021 bis Dezember 2021 im Tumorzentrum der Shanxi Medical University operativ behandelt wurden. Das mRNA-Niveau von PTK2 wurde mittels quantitativer Echtzeit-Reverse-Transkriptase-Polymerase-Kettenreaktion (RT-qPCR) bestimmt und mit den klinisch-pathologischen Merkmalen der Patienten korreliert. Diese Studie wurde vom Ethikkomitee des Tumorzentrums genehmigt (JC2024036). Die Expression von PTK2 wurde außerdem in Endometriumkarzinomzellen durch RT-qPCR und Western Blot analysiert. Die Expression von PTK2 und deren Korrelation mit dem Patientenüberleben wurde anhand der Datenbanken TIMER und The Human Protein Atlas (HPA) untersucht. Ein PTK2-Knockdown-Modell wurde etabliert und dessen Einfluss auf Zellproliferation und -migration durch Cell Counting Kit-8 (CCK-8) und Transwell-Assays getestet. Potenzielle Deubiquitinidasen von PTK2 wurden mittels Ubibrowser vorhergesagt, und unter Verwendung der TIMER- und GEPIA-Datenbanken wurde die ubiquitin-spezifische Peptidase 5 (USP5) ausgewählt und deren Korrelation mit PTK2-Expression analysiert. Ein USP5-Knockdown-Modell wurde erstellt, und unter Behandlung mit dem Proteasominhibitor MG132 wurden Veränderungen der PTK2-Expression untersucht. Die Regulation von PTK2 durch USP5 wurde durch Co-Immunpräzipitation (Co-IP) validiert. Funktionelle Wiederherstellungsexperimente überprüften, ob USP5 die Proliferation und Migration von Endometriumkarzinomzellen über PTK2 beeinflusst. Zudem wurde EIF4A3 aus der Datenbank ENCORI ausgewählt und die Korrelation mit USP5-Expression analysiert. EIF4A3-Knockdown/-Überexpressionsmodelle wurden erstellt und mit Actinomycin D behandelt, um die regulatorische Wirkung auf USP5 zu bewerten. Ergebnisse Insgesamt wurden 29 Patienten eingeschlossen. PTK2 war in Tumorgewebe und Zellen hochreguliert (P<0,05) und mit einem kürzeren Gesamtüberleben assoziiert (log-rank P<0,05). Knockdown von PTK2 hemmte die Proliferation und Migration von Endometriumkarzinomzellen (P<0,05). USP5 korrelierte positiv mit PTK2 (P<0,05), Knockdown von USP5 beeinflusste die mRNA-Expression nicht, reduzierte jedoch das Proteinniveau (P<0,05), dieser Effekt war durch MG132 reversibel; Co-IP zeigte, dass Knockdown von USP5 die Ubiquitinierung von PTK2 erhöhte. Wiederherstellungsexperimente zeigten, dass Überexpression von USP5 PTK2 hochregulierte und die Proliferation sowie Migration förderte, während Knockdown von PTK2 diesen Effekt umkehrte (P<0,05); umgekehrt führte USP5-Knockdown zu Herunterregulation von PTK2 und Hemmung von Proliferation und Migration, die Überexpression von PTK2 kehrte dies um (P<0,05). Das RNA-bindende Protein EIF4A3 interagiert mit USP5 und korreliert positiv mit dessen Expression. Actinomycin-D-Experimente zeigten, dass EIF4A3 die Halbwertszeit der USP5-mRNA verlängert (P<0,05), Western Blot bestätigte die positive Regulation des USP5-Proteinniveaus (P<0,05). Schlussfolgerung PTK2 ist im Endometriumkarzinom hochreguliert und mit schlechtem Patientenüberleben assoziiert und stellt ein wichtiges nachgeschaltetes Molekül für die onkogene Funktion von USP5 dar. EIF4A3 reguliert USP5 positiv durch Stabilisierung der mRNA. Diese Studie enthüllt die Rolle der EIF4A3/USP5/PTK2-Signalachse im Endometriumkarzinom und bietet ein neues Ziel für die molekulare zielgerichtete Therapie.

Endometriumkarzinom;PTK2;USP5;EIF4A3;Zellproliferation;Zellmigration