背景と目的：トリプルネガティブ乳がん（triple-negative breast cancer、TNBC）は乳がんの中でも最も治療が困難な特殊なサブタイプであり、転移しやすく患者の予後が悪い。tRNA由来断片（tRNA-derived fragment、tRF）は新しいタイプの非コード小RNA分子であり、多様な病理生理学的過程に関与している。これまでにtRFおよびtiRNAのハイスループットシークエンシング技術を用いてTNBC組織から腫瘍抑制tiRNA-Metをスクリーニングしている。本研究は、TNBCの増殖および転移におけるtiRNA-Metの役割およびそのメカニズムを詳細に検討することを目的とする。方法：RNAプルダウン、液体クロマトグラフィー-質量分析（liquid chromatography-mass spectrometry、LC-MS）、RNA免疫沈降（RNA immunoprecipitation、RIP）技術を用いてtiRNA-Met特異的結合タンパク質をスクリーニング・同定した。細胞免疫蛍光実験によりtiRNA-Metと特異的結合タンパク質HNRNPFの共局在を検出し、リアルタイム定量逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction、qRT-PCR）およびウェスタンブロット法によりtiRNA-MetがHNRNPFのmRNA発現およびタンパク質レベルに及ぼす影響を検査した。トランスクリプトームシークエンシング（RNA sequencing、RNA-seq）を利用してtiRNA-Met過剰発現がMDA-MB-231細胞のトランスクリプトームに及ぼす影響を検出し、tiRNA-Metが調節するシグナル伝達経路および標的遺伝子を探索した。qRT-PCRにて標的遺伝子NECAB1の転写レベルを検証し、HNRNPFのノックダウンによりNECAB1の発現への影響を検出した。がんゲノムアトラス（The Cancer Genome Atlas、TCGA）およびGEPIAデータベースを用いてTNBC組織中のHNRNPFおよびNECAB1のmRNA発現レベルを解析し、UALCANデータベースを用いてHNRNPFタンパク質レベルを解析した。Kaplan-Meier PlotterデータベースをもとにNECAB1遺伝子およびHNRNPFの生存率解析を行った。プラスミドトランスフェクション法によりMDA-MB-231およびBT-549細胞でNECAB1を過剰発現させ、細胞計数試薬キット-8（cell counting kit-8、CCK-8）実験およびTranswell実験により細胞の増殖および浸潤能を評価した。tiRNA-Met抑制剤によりtiRNA-Met発現をノックダウンした状態でNECAB1を過剰発現またはHNRNPFを抑制し、CCK-8実験およびTranswell実験により細胞の増殖および浸潤能を検出した。結果：tiRNA-MetはHNRNPFと特異的に結合し主に細胞質に局在する。tiRNA-Metの過剰発現またはノックダウンはHNRNPFのmRNA発現およびタンパク質レベルに影響を及ぼさない。tiRNA-Metの過剰発現およびHNRNPFのノックダウンはそれぞれNECAB1の発現を著しく促進する。TCGA、GEPIA、UALCANデータベースの解析結果は、癌周囲組織に比べTNBC組織中のHNRNPF mRNAおよびタンパク質発現が著しく上昇し、一方でNECAB1の発現は著しく低下していることを示した（P<0.05）。Kaplan-Meier Plotterデータベースの解析結果は、NECAB1 mRNA発現レベルが患者の生存期間と正の相関を示し（P<0.05）、HNRNPFタンパク質発現レベルは患者の生存期間と負の相関を示した（P<0.05）。対照細胞と比較して、NECAB1を過剰発現させたMDA-MB-231およびBT-549細胞の増殖能および浸潤能は著しく低下した（P<0.05）。tiRNA-Metをノックダウンした状態でのNECAB1過剰発現またはHNRNPF抑制は、tiRNA-Metノックダウンによる細胞増殖および浸潤能の増強を逆転させた。結論：tiRNA-Metは標的としてHNRNPFと結合することでNECAB1の発現を増強し、TNBCの悪性進展を抑制する。

トリプルネガティブ乳がん;tRNA由来断片;tiRNA-Met;HNRNPF;NECAB1