Mecanismo de ação dos exossomos derivados do soro que carregam miR-143-3p na regulação direcionada de BPTF e impacto na progressão maligna do câncer gástrico

QUAN Zhenhao ,  

LIN Lin ,  

XU Feipeng ,  

HUANG Renwei ,  

CHEN Rihong ,  

SUN Kaiyu ,  

摘要

Contexto e objetivo: miR-143-3p pode inibir a proliferação, invasão, migração, ciclo celular e a transição epitélio-mesenquimal das células do câncer gástrico. BPTF, como um oncogene, é altamente expresso no câncer gástrico e está associado ao mau prognóstico dos pacientes. Exossomos, como vesículas extracelulares com uma estrutura de bicamada lipídica, liberadas por várias células e carregando miRNA, podem desempenhar um papel supressor de tumor no início e desenvolvimento do câncer gástrico. No entanto, ainda não está claro se os exossomos derivados do soro que carregam miR-143-3p podem influenciar a progressão maligna do câncer gástrico por meio da regulação direcionada de BPTF. Este estudo visa explorar o mecanismo pelo qual os exossomos derivados do soro que carregam miR-143-3p regulam direcionadamente BPTF e afetam a progressão maligna do câncer gástrico. Métodos: A expressão de miR-143-3p e BPTF em tecidos de câncer gástrico e nas linhas celulares de câncer gástrico humano MKN-45, HGC-27 e MGC-803 foi detectada por reação em cadeia da transcriptase reversa quantitativa em tempo real (qRT-PCR). Os exossomos foram extraídos e caracterizados a partir do soro de pacientes com câncer gástrico e voluntários saudáveis, e foi realizado um experimento de captação em células MGC-803. A regulação direcionada de BPTF por miR-143-3p transportado nos exossomos derivados do soro foi verificada por Western blot e ensaio de repórter de dupla luciferase. As células MGC-803 foram divididas aleatoriamente em grupo normal, grupo Exo-miR-143-3p, grupo siRNA-NC, grupo si-BPTF, grupo Exo-miR-143-3p+pcDNA e grupo Exo-miR-143-3p+pcDNA-BPTF; após as intervenções com exossomos contendo miR-143-3p derivados do soro, controle negativo de siRNA BPTF, plasmídeo de siRNA BPTF vazio e plasmídeo de superexpressão de BPTF, foram realizados experimentos de qRT-PCR e Western blot para detectar a expressão de BPTF. Apoptose celular, invasão, migração e grau de proliferação foram avaliados por citometria de fluxo, transwell e kit de contagem celular-8 (CCK-8). Um modelo de xenoinjeção subcutânea foi estabelecido pela inoculação subcutânea de células MGC-803 em camundongos nus BALB/c, e o peso e volume tumoral subcutâneo foram medidos após as mesmas intervenções e agrupamentos. Resultados: Em comparação com tecidos paraneoplásicos emparelhados, a expressão de miR-143-3p foi significativamente reduzida nos tecidos de câncer gástrico (P<0,05), e a expressão do mRNA de BPTF foi significativamente aumentada (P<0,05). Em comparação com células GES-1, a expressão de miR-143-3p nas células MKN-45, HGC-27 e MGC-803 foi significativamente reduzida (P<0,05), e a expressão do mRNA de BPTF foi significativamente aumentada (P<0,05). Este estudo conseguiu extrair exossomos derivados do soro. Os exossomos derivados do soro foram captados com sucesso pelas células MGC-803, e os exossomos derivados do soro de voluntários saudáveis aumentaram a expressão de miR-143-3p nas células MGC-803. Os exossomos derivados do soro que carregam miR-143-3p podem regular direcionadamente BPTF. Em comparação com o grupo normal, os grupos Exo-miR-143-3p, si-BPTF e Exo-miR-143-3p+pcDNA apresentaram expressão relativa mais baixa de BPTF, menor número de invasões e migrações, menor atividade celular, redução no peso e volume tumoral subcutâneo em camundongos (P<0,05) e taxa de apoptose aumentada (P<0,05). Em comparação com o grupo Exo-miR-143-3p, o grupo Exo-miR-143-3p+pcDNA-BPTF apresentou expressão relativa mais alta de BPTF, maior número de invasões e migrações, maior atividade celular, maior peso e volume tumoral subcutâneo em camundongos (P<0,05) e taxa de apoptose reduzida (P<0,05). Conclusão: Os exossomos derivados do soro que carregam miR-143-3p podem regular negativamente BPTF de forma direcionada e inibir a progressão maligna do câncer gástrico.

关键词

exossomos derivados do soro;miR-143-3p;regulação direcionada;BPTF;câncer gástrico;progressão maligna

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