Contexto e objetivo: O câncer de mama triplo negativo (triple-negative breast cancer, TNBC) é um subtipo especial de câncer de mama considerado o mais desafiador para tratamento, caracterizado pela alta tendência à metástase e prognóstico ruim para os pacientes. Fragmentos derivados de tRNA (tRNA-derived fragment, tRF) são uma nova classe de pequenas moléculas de RNA não codificante envolvidas em diversos processos fisiopatológicos. Anteriormente, por meio de sequenciamento de alto desempenho de tRF e tiRNA, foi identificado tiRNA-Met supressor tumoral nos tecidos de TNBC. Este estudo visa investigar aprofundadamente o papel e o mecanismo de tiRNA-Met no crescimento e na metástase do TNBC. Métodos: Foram usadas técnicas de RNA Pull-Down, cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massa (liquid chromatography-mass spectrometry, LC-MS) e imunoprecipitação de RNA (RNA immunoprecipitation, RIP) para selecionar e identificar proteínas que se ligam especificamente ao tiRNA-Met. A colocalização entre tiRNA-Met e a proteína específica HNRNPF foi detectada por meio de experimentos de imunofluorescência celular, e o efeito de tiRNA-Met na expressão de mRNA de HNRNPF e nos níveis de proteína foi avaliado por reação em cadeia da polimerase reversa quantitativa em tempo real (qRT-PCR) e Western blot. O impacto da superexpressão de tiRNA-Met no transcriptoma das células MDA-MB-231 foi avaliado por sequenciamento de RNA (RNA sequencing, RNA-seq), explorando as vias de sinalização e genes-alvo regulados pelo tiRNA-Met; o nível de transcrição do gene alvo NECAB1 foi verificado por qRT-PCR; o efeito da redução da expressão de HNRNPF sobre a expressão de NECAB1 foi avaliado. Os níveis de expressão de mRNA de HNRNPF e NECAB1 nos tecidos TNBC foram analisados usando os bancos de dados The Cancer Genome Atlas (TCGA) e GEPIA, o nível proteico de HNRNPF foi analisado por meio do banco de dados UALCAN; análises de sobrevida para os genes NECAB1 e HNRNPF foram realizadas usando o banco Kaplan-Meier Plotter. NECAB1 foi superexpresso nas células MDA-MB-231 e BT-549 por transfeção de plasmídeo, e a capacidade de proliferação e invasão celular foi avaliada por ensaios CCK-8 (cell counting kit-8) e Transwell, respectivamente. Sob inibição e silenciamento da expressão de tiRNA-Met, NECAB1 foi superexpresso ou HNRNPF foi inibido, e a proliferação e invasão celular foram avaliadas por ensaios CCK-8 e Transwell. Resultados: tiRNA-Met liga-se especificamente à HNRNPF e localiza-se principalmente no citoplasma; a superexpressão ou silenciamento de tiRNA-Met não afeta a expressão de mRNA nem os níveis proteicos de HNRNPF. A superexpressão de tiRNA-Met e o silenciamento de HNRNPF promovem significativamente a expressão de NECAB1. As análises dos bancos TCGA, GEPIA e UALCAN mostraram que, em comparação com os tecidos adjacentes ao câncer, a expressão de mRNA e proteína de HNRNPF nos tecidos TNBC estava significativamente aumentada, enquanto a expressão de NECAB1 estava significativamente diminuída (P<0.05). A análise do banco Kaplan-Meier Plotter indicou uma correlação positiva entre o nível de expressão de mRNA de NECAB1 e a sobrevivência dos pacientes (P<0.05), enquanto o nível de expressão proteica de HNRNPF se correlacionou negativamente (P<0.05). Em comparação com as células controle, as células MDA-MB-231 e BT-549 com superexpressão de NECAB1 exibiram redução significativa na capacidade de proliferação (P<0.05) e invasão (P<0.05); a superexpressão de NECAB1 ou o silenciamento de HNRNPF sobre a base da supressão de tiRNA-Met reverteram o aumento da proliferação e invasão induzidos pelo silenciamento de tiRNA-Met. Conclusão: tiRNA-Met promove a expressão de NECAB1 por meio da ligação direcionada a HNRNPF, inibindo assim a progressão maligna do TNBC.

câncer de mama triplo negativo;fragmentos derivados de tRNA;tiRNA-Met;HNRNPF;NECAB1