Предпосылки и цель: тройной негативный рак груди (triple-negative breast cancer, TNBC) является особым подтипом рака груди, который считается наиболее трудным для лечения, характеризуется высокой склонностью к метастазированию и плохим прогнозом для пациентов. Фрагменты, производные от тРНК (tRNA-derived fragment, tRF), представляют собой новый класс некодирующих малых РНК, участвующих в различных патологофизиологических процессах. Ранее с использованием высокопроизводительного секвенирования tRF и tiRNA в тканях TNBC был выделен подавляющий опухоль tiRNA-Met. Цель данного исследования — глубокое изучение роли и механизма действия tiRNA-Met в росте и метастазировании TNBC. Методы: для скрининга и идентификации специфических белков, связывающихся с tiRNA-Met, использовали методы RNA Pull-Down, жидкостной хроматографии с масс-спектрометрией (LC-MS) и иммунопреципитации РНК (RIP). Совместное локализованное обнаружение tiRNA-Met и специфического белка связывания HNRNPF проводили с помощью клеточного иммунофлуоресцентного анализа, а влияние tiRNA-Met на экспрессию мРНК HNRNPF и уровень белка определяли методами количественной обратной транскрипционной ПЦР в реальном времени (qRT-PCR) и вестерн-блоттинга. Изучали влияние сверхэкспрессии tiRNA-Met на транскриптом клеток MDA-MB-231 с помощью секвенирования РНК (RNA-seq), исследовали сигнальные пути и гены-мишени, регулируемые tiRNA-Met; уровень транскрипции гена-мишени NECAB1 верифицировали с помощью qRT-PCR; оценивали влияние снижения экспрессии HNRNPF на экспрессию NECAB1. Анализировали уровни экспрессии мРНК HNRNPF и NECAB1 в тканях TNBC с использованием базы данных The Cancer Genome Atlas (TCGA) и GEPIA, уровень белка HNRNPF — с помощью базы данных UALCAN; проводили анализ выживаемости генов NECAB1 и HNRNPF на базе Kaplan-Meier Plotter. Проводили сверхэкспрессию NECAB1 в клетках MDA-MB-231 и BT-549 с помощью трансфекции плазмидой, оценивали пролиферацию и инвазию клеток с помощью тестов CCK-8 и Transwell. В условиях ингибирования tiRNA-Met и подавления его экспрессии сверхэкспрессировали NECAB1 или подавляли HNRNPF, оценивали пролиферацию и инвазию клеток тестами CCK-8 и Transwell. Результаты: tiRNA-Met специфически связывается с HNRNPF и локализуется преимущественно в цитоплазме; сверхэкспрессия и подавление tiRNA-Met не влияют на уровни мРНК и белка HNRNPF. Сверхэкспрессия tiRNA-Met и подавление HNRNPF значительно усиливают экспрессию NECAB1. Анализы TCGA, GEPIA и UALCAN показали значительное повышение экспрессии мРНК и белка HNRNPF в тканях TNBC по сравнению с паракарциномой, а экспрессия NECAB1 была значительно снижена (P<0.05). Анализ базы Kaplan-Meier Plotter выявил положительную корреляцию уровня экспрессии мРНК NECAB1 с выживаемостью пациентов (P<0.05), тогда как уровень белка HNRNPF коррелировал отрицательно (P<0.05). По сравнению с контрольными клетками, клетки MDA-MB-231 и BT-549 с сверхэкспрессией NECAB1 показывали значительное снижение пролиферации (P<0.05) и инвазии (P<0.05); сверхэкспрессия NECAB1 или подавление HNRNPF на фоне подавления tiRNA-Met обращают вспять усиление пролиферации и инвазии, вызванное подавлением tiRNA-Met. Выводы: tiRNA-Met усиливает экспрессию NECAB1 путем целевого связывания с HNRNPF, что приводит к подавлению злокачественного прогрессирования TNBC.

тройной негативный рак груди;tRNA-производные фрагменты;tiRNA-Met;HNRNPF;NECAB1