Antecedentes y objetivo: El carcinoma hepatocelular es el tercer tumor maligno con mayor tasa de mortalidad, y las células madre tumorales se consideran la semilla de la recurrencia tumoral, mientras que el efecto Warburg se refiere a la característica metabólica de la glucólisis aeróbica en las células tumorales. El objetivo es explorar la correlación entre la capacidad de células madre de las células tumorales hepáticas y las características del metabolismo de la glucosa celular. Métodos: Se utilizó citometría de flujo para seleccionar células tumorales con alta expresión de marcadores de células madre en las líneas celulares hepáticas Huh-7 y MHCC97H, cultivadas en suspensión sin suero, observando cambios morfológicos y detectando la expresión de marcadores de células madre y enzimas del metabolismo de la glucosa, luego se compararon las capacidades de captación de glucosa y producción de lactato de ambas células. Resultados: Las células madre tumorales hepáticas formaron esferas en el cultivo en suspensión sin suero; en comparación con las células tumorales no madre, la expresión de enzimas clave de la glucólisis y los marcadores de células madre aumentó significativamente (P<0,05), con una capacidad aumentada de captación de glucosa y producción de lactato (P<0,05). La capacidad de células madre de las células tumorales se correlacionó con la actividad glicolítica. Conclusión: La técnica de cultivo en suspensión sin suero puede utilizarse para enriquecer células madre tumorales hepáticas; en comparación con las células tumorales no madre, las células madre tumorales hepáticas tienen un mayor grado de transformación glicolítica, y la capacidad de células madre de las células tumorales está relacionada con la glucólisis tumoral.