中国癌症杂志 ›› 2013, Vol. 23 ›› Issue (6): 413-419.doi: 10.3969/j.issn.1007-3969.2013.06.003
邹燕梅,熊华,肖志平,于世英,袁响林
ZOU Yan-mei, XIONG Hua, XIAO Zhi-ping, YU Shi-ying, YUAN Xiang-lin
摘要:
背景与目的:乏氧导致肿瘤细胞放射敏感性下降是引起肿瘤放疗抵抗、复发转移的根源。HIF-1α基因在乏氧调控中起关键作用,但HIF-1α基因在乏氧肺腺癌放射敏感性中的作用及其与自噬的关系尚未阐明。本研究建立利用RNAi沉默HIF-1α基因的乏氧肺腺癌A549细胞模型,以此探讨HIF-1α对乏氧细胞放射敏感性和自噬的影响。方法:构建靶向抑制HIF-1α的shRNA表达质粒,转染乏氧A549细胞,筛选稳定表达的克隆细胞,将其命名为A549/HIF-1α-shRNA,同时设阴性对照A549/Neg-shRNA。克隆形成实验检测细胞D0、SF2、SER等值。Western-blot检测细胞照射前后HIF-1α、LC3、c-parp蛋白的表达。结果:乏氧A549细胞的SF2为0.62,高于常氧A549细胞,SER为1.45;乏氧A549细胞照射后LC3Ⅱ增加,c-parp下调。乏氧A549细胞HIF-1α表达增加;A549/HIF-1α-shRNA细胞HIF-1α表达降低;A549/HIF-1α-shRNA细胞的SF2为0.45,SER为0.72,低于A549/Neg-shRNA细胞;A549/HIF-1α-shRNA 细胞照射后LC3Ⅱ降低,c-parp上调。结论:稳定转染及RNAi技术建立的HIF-1α表达抑制克隆可以成为简单实用的细胞模型;shRNA抑制HIF-1α的表达可提高乏氧A549细胞的放射敏感性,降低自噬活性。