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乳腺癌中心体调控蛋白SEC23B在肿瘤浸润转移中的作用及其机制研究
冷婕, 邱国春, 张菠, 蒲艳
中国癌症杂志    2023, 33 (2): 152-161.   DOI: 10.19401/j.cnki.1007-3639.2023.02.008
摘要   (172 HTML19 PDF(pc) (2628KB)(347)  

背景与目的: 新的中心体调控蛋白Sec23同系物B(Sec23 homolog B,SEC23B)可以调节细胞中的自噬,从而提供有助于肿瘤生长和远处转移的能量和营养。然而,这种作用是否参与乳腺癌的浸润转移尚不清楚。本研究旨在探讨SEC23B在乳腺癌浸润转移中的作用及其分子机制。方法: 使用Kaplan-Meier Plotter数据库和HCMDB数据库分析SEC23B表达与乳腺癌预后、转移之间的关联。将MCF-7细胞分为载体组(control)和SEC23B过表达质粒组(SEC23B),以及将MDA231-LM2细胞分为SEC23B敲低组(sh-SEC23B)和对照组(sh-NC)。采用蛋白质印迹法(Western blot)检测乳腺癌细胞中SEC23B、自噬相关蛋白[死骨片1(SQSTM1,p62)、微管相关蛋白1的轻链3(microtubule-associated-protein light-chain-3,LC3)]和细胞外调节蛋白激酶(extracellular-regulated protein kinases,ERK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号转导通路蛋白的表达。通过transwell实验和伤口愈合实验评估细胞迁移,采用免疫荧光染色检测细胞中自噬颗粒。此外,构建体内腹膜内肿瘤模型研究SEC23B体内对乳腺癌细胞转移的影响。结果: SEC23B高表达的乳腺癌患者的总生存期明显短于SEC23B低表达的患者。SEC23B在转移性乳腺癌中的表达明显高于没有转移的乳腺癌原发性乳腺癌细胞(MCF-7、BT-549、MDA-MB-468和MDA-MB-453)中的SEC23B蛋白水平低于转移性乳腺癌细胞(MDA231-LM2和ZR-75-30)。与control组相比,SEC23B组明显加速了细胞迁移(P<0.001)。与sh-NC组相比,sh-SEC23B组明显降低了细胞迁移(P<0.001)。与control组相比,SEC23B组LC3A/B的表达水平和自噬颗粒的形成明显增加,而p62蛋白表达和mTOR、ERK的磷酸化水平降低。与sh-NC组相比,sh-SEC23B组LC3A/B表达水平和自噬颗粒的形成显著降低,和mTOR、ERK的磷酸化水平升高,特别是在饥饿条件下结果更显著。在体内实验中,与sh-NC组相比,sh-SEC23B组肿瘤重量显著降低(P<0.01),并且小鼠肿瘤组织中坏死组织增多和肺组织肿瘤转移减少。sh-SEC23B组小鼠肺转移肿瘤数和LC3免疫组织化学染色明显低于sh-NC组(P<0.01)。结论: SEC23B通过抑制ERK/mTOR信号转导通路来诱导乳腺癌自噬,并促进癌细胞转移。



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图5 SEC23B敲低在体内抑制乳腺癌转移和自噬
正文中引用本图/表的段落
为了进一步验证SEC23B对移植瘤的影响,小鼠皮下注射了具有稳定SEC23B敲低(sh-SEC23B)或阴性对照(sh-NC)的MDA231-LM2细胞。与sh-NC组相比,sh-SEC23B组肿瘤体积更小,并且肿瘤重量显著降低(P<0.01,图5A)。H-E染色结果显示,与sh-NC组相比,sh-SEC23B组小鼠肿瘤组织中坏死组织增多(图5B),并且肺组织肿瘤转移减少(图5C)。取肺组织进行Bouin固定,sh-SEC23B组小鼠肺转移肿瘤数明显低于sh-NC组(P<0.01,图5D)。此外,sh-SEC23B组小鼠肿瘤组织中LC3免疫组织化学染色明显低于sh-NC组(P <0.001,图5E)。结果表明,SEC23B可以作为致癌基因在体内促进乳腺癌细胞生长、转移和自噬。
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