中国癌症杂志

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慢病毒介导的shRNA靶向干扰I2PP2A胃癌稳定细胞株的建立

师海蓉1,陈莹1,李长雷2,邱文洪3   

  1. 1. 江汉大学医学院病理学与病理生理学教研室,湖北 武汉 430056 ;
    2. 江汉大学医学院免疫学教研室,湖北 武汉 430056 ;
    3. 江汉大学医学院实验动物中心,湖北 武汉 430056
  • 出版日期:2015-05-30 发布日期:2015-08-11
  • 通信作者: 邱文洪 E-mail:qiuwenhong@hotmail.com

SHI Hairong1, CHEN Ying1, LI Changlei2, QIU Wenhong3   

  1. 1.Department of Pathology and Pathophysiology, School of Medicine, Jianghan University, Wuhan Hubei 430056, China; 2.Department of Immunology, School of Medicine, Jianghan University, Wuhan Hubei 430056, China; 3.Laboratory Animals Center, School of Medicine, Jianghan University, Wuhan Hubei 430056, China
  • Published:2015-05-30 Online:2015-08-11
  • Contact: QIU Wenhong E-mail: qiuwenhong@hotmail.com

摘要:   背景与目的:蛋白磷酸酶2A抑制剂-2(inhibitor 2 of protein phosphatase 2A,I2PP2A)在包括胃癌的多种肿瘤中过度表达,提示其可能在胃癌的发生中发挥重要作用。为进一步探讨I2PP2A的功能及其在胃癌发生中的作用,建立稳定抑制I2PP2A基因表达的人胃癌BGC823细胞株。方法:筛选出I2PP2A基因的RNA干扰(RNA interference,RNAi)有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA并构建pGLV2_shRNA_I2PP2A慢病毒载体,酶切和测序鉴定正确后,经病毒包装,感染BGC823细胞,经嘌呤霉素筛选稳定表达细胞株,通过实时定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)和蛋白[质]印迹法(Western blot)鉴定I2PP2A的表达。结果:重组慢病毒质粒经测序鉴定正确;RT-PCR和Western blot证实干扰I2PP2A后,BGC823细胞株中I2PP2A表达水平明显降低,抑制率约为90%。结论:成功构建了I2PP2A shRNA慢病毒表达载体,建立了稳定抑制I2PP2A基因表达的人胃癌BGC823细胞株,为进一步研究I2PP2A在胃癌发生中的作用提供了可靠的细胞模型。