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TMCO1对宫颈癌细胞增殖和迁移能力的影响
陈珣, 郑真霞, 阮雪茹
中国癌症杂志    2024, 34 (6): 571-580.   DOI: 10.19401/j.cnki.1007-3639.2024.06.005
摘要   (103 HTML9 PDF(pc) (1337KB)(415)  

背景与目的:跨膜和卷曲螺旋结构域1(transmembrane and coiled-coil domains 1,TMCO1)是新近发现的一种内质网钙离子通道蛋白,已被发现与多种肿瘤的进展相关,但其在宫颈癌中的作用尚未明确。本研究旨在探讨TMCO1对宫颈癌HeLa细胞增殖和迁移能力的影响。方法:通过质粒转染宫颈癌HeLa细胞,获得稳定过表达TMCO1的细胞株和稳定敲减TMCO1的细胞株。采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)实验、克隆形成实验和EdU标记实验检测细胞增殖能力,采用transwell实验检测细胞迁移能力,并将稳定过表达TMCO1细胞与对照细胞进行蛋白质组学分析。结果:CCK-8实验和克隆形成实验显示,宫颈癌HeLa细胞过表达TMCO1后,增殖能力显著增加(P<0.05);EdU标记实验显示,宫颈癌HeLa细胞过表达TMCO1后,进行活跃DNA合成的细胞数量明显增多(P<0.01)。宫颈癌HeLa细胞敲减TMCO1后,细胞周期抑制蛋白p27表达增加,组蛋白H3的磷酸化减弱;克隆形成实验显示,敲减TMCO1显著抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖(P<0.001);EdU标记实验显示,宫颈癌HeLa细胞敲减TMCO1后,进行活跃DNA合成的细胞数量明显减少(P <0.05)。Transwell实验显示,宫颈癌HeLa细胞过表达TMCO1后,迁移能力显著增加(P<0.001);敲减TMCO1显著抑制宫颈癌HeLa细胞的迁移(P<0.001)。稳定过表达TMCO1细胞中与细胞外基质-黏附及磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)信号转导通路显著激活,而核糖体相关等通路受到抑制。结论:TMCO1过表达显著促进宫颈癌HeLa细胞的增殖和迁移,敲减TMCO1显著抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖和迁移,TMCO1可能通过调节细胞的黏附及信号转导影响HeLa细胞的增殖和迁移。



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图3 敲减TMCO1抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖
正文中引用本图/表的段落
通过设计两条独立的靶向TMCO1基因序列的shRNA,并克隆入pLKO.1慢病毒载体,感染宫颈癌细胞HeLa,经嘌呤霉素筛选获得稳定敲减TMCO1的细胞,并以感染空载体(pLKO.1)病毒的细胞作为对照。收取细胞通过Western blot法检测TMCO1的敲减情况,以及细胞周期抑制蛋白p27、组蛋白H3的磷酸化情况。宫颈癌HeLa细胞敲减TMCO1后,细胞周期抑制蛋白p27表达增加,组蛋白H3的磷酸化减少(图3A)。
将上述的TMCO1稳定敲减细胞及对照细胞按1 000个细胞/孔接种至6孔板,培养10 d后结晶紫染色并统计克隆形成数量。以感染空载体(pLKO.1)的细胞形成克隆数为1.0,获得TMCO1稳定敲减细胞形成克隆数的相对值。克隆形成实验显示,敲减TMCO1显著抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖(P<0.001,图3B、C)。
将上述的TMCO1稳定敲减细胞及对照细胞进行EdU标记,以检测进行活跃DNA合成的细胞数量。按照实验步骤要求,分别计数EdU标记(绿色荧光)的细胞相对比例(除以同一视野中细胞的数量,Hoechst用于标记细胞核)。EdU标记实验显示,宫颈癌HeLa细胞敲减TMCO1后,进行活跃DNA合成的细胞数量明显减少(P <0.05,图3D、E)。
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