中国癌症杂志 ›› 2013, Vol. 23 ›› Issue (4): 241-247.doi: 10.3969/j.issn.1007-3969.2013.04.00X
高雯1,2,臧荣余1,王雁2,杨丽娜2,刘杨1,亓子豪2,尹胜1,杨恭2
1.复旦大学附属肿瘤医院妇科,复旦大学上海医学院肿瘤学系,上海200032 ;
2.复旦大学附属肿瘤医院实验研究中心,复旦大学上海医学院肿瘤学系,上海200032
GAO Wen1,2, ZANG Rong-yu1, WANG Yan2, YANG Li-na2, LIU Yang1, QI Zi-hao2, YIN Sheng1, YANG Gong2
摘要:
背景与目的:最近研究表明卵巢高级别浆液性癌可能起源于输卵管上皮。本课题通过基因沉默和端粒酶导入技术将原代输卵管上皮细胞永生化,为以后建立恶性转化细胞系和卵巢癌动物模型奠定基础。方法:分离并培养输卵管上皮细胞,导入p53和pRb shRNA结合hTERTcDNA,建立p53和pRb基因同时沉默并过表达hTERT的永生化细胞系,并对永生化细胞系进行连续传代、沉默基因的蛋白质印迹法(Western blot)测定、SA-β-gal染色和非停泊生长实验及体内致瘤活性鉴定。结果:我们建立了稳定表达p53、pRbshRNA和hTERT的永生化输卵管上皮细胞系:FTE248116/p53i+pRbi+hTERT及FTE312249/p53i+pRbi+hTERT。结论:可以通过导入端粒酶基因及敲除抑癌基因p53和pRb来建立永生化细胞系,并有望于构建恶性转化细胞系和人类高级别浆液性卵巢癌动物模型。