中国癌症杂志 ›› 2017, Vol. 27 ›› Issue (2): 95-101.doi: 10.19401/j.cnki.1007-3639.2017.02.003
陈 昊,周 鹏,徐晶晶,周 珺,国 风
CHEN Hao, ZHOU Peng, XU Jingjing, ZHOU Jun, GUO Feng
摘要: 背景与目的:miR-17-92基因簇与多种疾病的发生密切相关,其在肺癌、肝癌、胃癌和前列腺癌等多种肿瘤细胞中均高表达。本研究利用慢病毒包装系统建立稳定高表达miR-17-92基因簇的DU145细胞株,探讨miR-17-92基因簇对前列腺癌DU145细胞的迁移、侵袭能力及对顺铂耐药性的影响。方法:构建高表达miR-17-92基因簇的表达载体,转染DU145细胞株,同时转染空载体作为对照,并用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)进行鉴定。用xCELLigence系统监测细胞的迁移、侵袭能力及顺铂处理后的生长情况;通过划痕实验观察细胞的迁移情况;采用蛋白[质]
印迹法(Western blot)、凝胶酶谱实验和RTFQ-PCR检测相关蛋白质和基因的表达以探讨miR-17-92增强DU145细胞的迁移、侵袭能力及对顺铂耐药性的相关机制。结果:DU145-miR-17-92细胞迁移速率和侵袭能力高于DU145-control细胞(P<0.01)。DU145-miR-17-92细胞中整合素β1的蛋白质表达水平和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotein-9,MMP-9)的活性显著高于DU145-control细胞。顺铂处理后,DU145-miR-17-92细胞的生长速度自12 h起快于DU145-control细胞并呈顺铂耐药性(P<0.01)。细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinases,ERK1/2)在DU145-miR-17-92细胞中呈现持续高水平磷酸化,顺铂处理后,其磷酸化水平无明显变化。DU145-miR-17-92细胞中切除修复互补交叉基因1(excision repair cross complementing1,ERCC1)的mRNA和蛋白质表达水平显著高于DU145-control细胞。结论:高表达miR-17-92增强了DU145细胞的迁移、侵袭能力,其机制与整合素β1的表达上调及MMP-9活性增强有关。此外,高表达miR-17-92增强了DU145细胞对顺铂的耐药性,该过程与ERK1/2的磷酸化水平增加和ERCC1的表达水平上调相关。