中国癌症杂志 ›› 2021, Vol. 31 ›› Issue (6): 447-454.doi: 10.19401/j.cnki.1007-3639.2021.06.002
胡雅琼 1 ,白 俊 1 ,陈 琳 1 ,陈新璐 1 ,张丽萍 1 ,周丹丹 1 ,王 玉 2 ,尹崇高 3 ,李洪利 4 ,刘雨清 1
HU Yaqiong 1 , BAI Jun 1 , CHEN Lin 1 , CHEN Xinlu 1 , ZHANG Liping 1 , ZHOU Dandan 1 , WANG Yu 2 , YIN Chonggao 3 , LI Hongli 4 , LIU Yuqing 1
摘要: 背景与目的:肺腺癌是非小细胞肺癌的一种亚型,虽在诊断和治疗方面已经取得了很大进展,但晚期肺腺癌临床预后和总生存仍较差。近年来多项研究表明,miRNA在多种癌症中发挥作用,并在细胞增殖、转移、炎症等生物学过程中发挥重要作用。探究miR-625-5p对肺腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响及分子机制,旨在为后续肺腺癌的诊断和治疗提供新的思路。方法:利用GEO数据库查找肺腺癌组织中差异表达的miRNA。采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测miR-625-5p在各肺腺癌细胞系中的表达情况,采用EdU细胞增殖实验和transwell侵袭实验研究miR-625-5p对肺腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响;通过生物信息学预测miR-625-5p靶向结合的关键基因;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测对蛋白激酶cAMP激活催化亚基α(protein kinase cAMP-activated catalytic subunit alpha,PRKACA)在肺腺癌细胞中的表达情况进行验证,采用双荧光素酶报告基因实验和Western blot分析miR-625-5p与PRKACA之间的靶向关系。Western blot检测共转染敲低PRKACA质粒和敲低miR-625-5p质粒后各组细胞PRKACA的表达情况。采用EdU细胞增殖实验和transwell侵袭实验检测共转染以后各组肺腺癌细胞增殖和侵袭能力的改变。结果:miR-625-5p在肺腺癌组织(P<0.000 1)和各组肺腺癌细胞(P<0.000 1)中表达上调。EdU细胞增殖实验和transwell侵袭实验结果显示,miR-625-5p能够促进肺腺癌细胞的增殖(P=0.002 3)和侵袭(P=0.000 3)能力。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-625-5p能与PRKACA靶向结合(P=0.000 8)。在肺腺癌细胞中,miR-625-5p与PRKACA的表达呈负相关(P<0.000 1)。miR-625-5p下调能够逆转敲低PRKACA对A549细胞增殖(P=0.011 9)和侵袭(P=0.001 5)能力的促进作用。结论:miR-625-5p在肺腺癌组织和细胞中表达上调,并通过负向调控PRKACA促进肺腺癌细胞增殖和侵袭。
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