中国癌症杂志 ›› 2017, Vol. 27 ›› Issue (11): 873-878.doi: 10.19401/j.cnki.1007-3639.2017.11.006
肖华平1,2,谢 辉1,罗春阳1,李 庆1,方玉江2
XIAO Huaping1,2, XIE Hui1, LUO Chunyang1, LI Qing1, FANG Yujiang2
摘要: 背景与目的:大部分胰腺癌具有高表达诱骗受体-3(decoy receptor 3,DcR3)的特征,而后者与FasL凋亡途径相关,可能导致胰腺癌对化疗耐药。该研究旨在探讨RNA干扰沉默DcR3基因对人胰腺癌细胞化疗药物敏感性的影响及其可能机制。方法:构建带有DcR3-siRNA序列的稳定表达质粒,通过LipofectamineTM2000转染至人胰腺癌细胞AsPC-1细胞株,筛选出转染后稳定低表达DcR3的胰腺癌细胞,同时设未转染对照组(control组)和转染阴性质粒对照组(mock组)。应用ELISA和蛋白[质]印迹法(Western blot)检测各组AsPC-1细胞中DcR3的蛋白表达;MTT实验检测各组AsPC-1细胞对吉西他滨的敏感性;流式细胞术检测各组AsPC-1细胞凋亡情况;Western blot和实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测各组AsPC-1细胞中FasL、Caspase-8、Caspase-3蛋白和mRNA的表达。结果:转染DcR3-siRNA后AsPC-1细胞中DcR3蛋白较其他对照组明显降低;转染DcR3-siRNA后AsPC-1细胞对吉西他滨的敏感性显著增加;沉默DcR3基因可以上调FasL、Caspase-8和Caspase-3的表达并促进吉西他滨诱导的细胞凋亡。结论:RNA干扰沉默DcR3基因可激活FasL/Caspase凋亡途径,促进肿瘤细胞凋亡,增加人胰腺癌AsPC-1细胞对化疗药物的敏感性。